T spot tb инвитро: T-SPOT.TB, сдать анализ на туберкулез

Рекомбинантный in vitro тест T-SPOT.TB как метод скрининга для ранней диагностики туберкулезной инфекции | Еременко

1. Аксенова В. А., Леви Д. Т., Александрова Н. В., Кудлай Д. А. Современное состояние вопроса заболеваемости детей туберкулезом, препараты для профилактики и диагностики инфекции // Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. – 2017. – Т. 17, № 3. – С. 145-151.

2. Ананьев С. М. Диагностика латентной туберкулезной инфекции у детей // Туб. информ. – 2017. – Т. 1, № 2 (2). – С. 15-23.

3. Бородулина Е. А., Бородулин Б. Е., Амосова Е. А., Табашникова А. И., Титугина А. Ю. Туберкулиновые пробы и их сравнительная оценка // Туб. и болезни легких. – 2010. – Т. 87, № 8. – С. 13-17.

4. Овсянкина Е. С., Губкина М. Ф., Панова Л. В., Юхименко Н. В. Анализ эффективности кожных туберкулиновых проб для диагностики туберкулезной инфекции у детей и подростков // Вопросы практической педиатрии. – 2015. – Т. 10, № 5. – С. 36-43.

5. Слогоцкая Л. В., Богородская Е. М., Сенчихина О. Ю., Никитина Г. В., Кудлай Д. А. Формирование групп риска заболевания туберкулезом при различных иммунологических методах обследования детского населения // Российский педиатрический журнал. – 2017. – Т. 20, № 4. – С. 207-213.

6. Слогоцкая Л. В., Синицын М. В., Кудлай Д. А. Возможности иммунологических тестов в диагностике латентной туберкулезной инфекции и туберкулеза // Туб. и болезни легких. – 2019. – Т. 97, № 11. – С. 46-59.

7. Старшинова А. А., Довгалюк И. Ф., Зинченко Ю. С., Кудлай Д. А., Яблонский П. К. Иммунодиагностика туберкулеза сегодня: современные иммунологические тесты и дифференцированный подход к их применению в практике // Практическая пульмонология. – 2019. – № 2. – С. 28-33.

8. Старшинова А. А., Кудлай Д. А., Довгалюк И. Ф., Басанцова Н. Ю., Зинченко Ю. С., Яблонский П. К. Эффективность применения новых методов иммунодиагностики туберкулезной инфекции в Российской Федерации // Педиатрия. – 2019. – Т. 98, № 4. – С. 229-235. DOI: 10.24110/0031-403X-2019-98-4-229-235.

9. Турдумамбетова Г. К., Галиева Р. Ш., Байтелиева А. К. Скрининг латентной туберкулезной инфекции у детей младшего школьного возраста // Вестник Академии медицинских наук Таджикистана. – 2018. – Т. 8, № 3 (27). – С. 369-375. DOI: 10.31712/2221-7355-2018-8-3-369-375.

10. Chapman H. J., Lauzardo M. Advances in diagnosis and treatment of latent tuberculosis infection // J. Am. Board Fam. Med. – 2014. – Vol. 27, № 5. – P. 704-712.

11. Chiang S. S., Swanson S. D., Jeffrey R. S. New diagnostics for childhood tuberculosis review // Infectious Disease Clinics of North America. – 2015. – Vol. 29, № 3. ‒ Р. 477-502.

12. Colson P. W. Acceptance of treatment for latent tuberculosis infection: prospective cohort study in the United States and Canada. Tuberculosis Epidemiologic Studies Consortium // Int. J. Tuberc. Lung Dis. – 2013. – Vol. 17, № 4. – P. 473-479.

13. Diel R., Loddenkemper R., Nienhaus A. Predictive value of interferon-γ release assays and tuberculin skin testing for progression from latent TB infection to disease state: a meta-analysis // Chest. – 2012. – № 142 (1). – Р. 63-75.

14. Hur Y. G. Identification of immunological biomarkers which may differentiate latent tuberculosis from exposure to environmental nontuberculous mycobacteria in children // Clin. Vaccine Immunol. – 2014. – Vol. 21, № 2. – P. 133-142.

15. Shovkun L., Aksenova V., Kudlay D., Sarychev A. The role of immunological tests in the diagnosis of tuberculosis infection in children with juvenile idiopathic arthritis (JIA) // Europ. Respir. J. – 2018. – Vol. 52. – S62 – PA2733.

16. Slogotskaya L. V., Bogorodskaya E., Sentchichina O., Ivanova D., Nikitina G., Litvinov V., Seltsovsky P., Kudlay D. A., Nikolenko N., Borisov S. Effectiveness of tuberculosis detection using a skin test with allergen recombinant (CFP-10-ESAT-6) in children // Eur. Respir. J. – 2015. – Vol. 46, № S59. – С. РА4524.

17. Slogotskaya L. V., Litvinov V., Kudlay D. A., Ovsyankina E., Seltsovsky P., Ivanova D., Nikolenko N. New skin test with recombinant protein CFP10-ESAT6 in patients (children and adults) with tuberculosis, non-tuberculosis disease and latent TB infection // Eur. Respir. J. – 2012. – Vol. 40 (S56). – P. 416.

18. Slogotskaya L. V., Litvinov V., Ovsyankina E., Seltsovsky P., Kudlay D. Results of QuantiFERON-TB Gold in-tube and skin testing with recombinant proteins CFP-10-ESAT-6 in children and adolescents with TB or latent TB infection // Pediatr. Respir. Rev. – 2013. – Vol. 14, № 2. – P. S65.

19. Torres M. Effect of isoniazid on antigen-specific interferon-γ secretion in latent tuberculosis // Eur. Respir. J. – 2015. – Vol. 45, № 2. – P. 473-482.

20. Whitworth H. S., Scott M., Connell D. W., Dongés B., Lalvani A. IGRAs-

21. шлюз для диагностики туберкулеза на основе Т-клеток. Методы. ‒ 2013. – Vol. 61. – Р. 52-62. DOI: 10.1016 / j. ymeth.2012.12.012.

Информация для лабораторий — T‑SPOT.TB

ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЛАБОРАТОРИЙ

Что представляет собой тест T-SPOT.TB?

Тест T-SPOT.TB – это анализ крови, также известный как «тест высвобождения гамма-интерферона» (IGRA), иммунологический тест для диагностики инфицирования микобактериями туберкулеза.
Тест T-SPOT.TB представляет собой тест для диагностики in vitro, который позволяет количественно оценить ответ Т-лимфоцитов, которые были сенсибилизированы к микобактериям туберкулеза. T-SPOT.TB является косвенным тестом, позволяющим диагностировать инфицирование M. tuberculosis (включая заболевание туберкулезом), и предназначен для использования в совокупности с оценкой факторов риска, клинических, рентгенологических данных и других диагностических методов обследования.

Какие пробирки используются для забора крови?

Для взятия крови должны использоваться стандартные пробирки (содержащие литий-гепарин или натрий-гепарин) или пробирки для забора крови Vacutainer® СРТ™.

Можно ли использовать пробирки для взятия крови с ЭДТА?

ЭДТА нарушат секрецию гамма-интерферона клетками крови. Поэтому пробирки с этим антикоагулянтом нельзя использовать при взятии крови для теста T-SPOT.TB.

Какой объем крови требуется для проведения теста Т-SPOT. TB?

Требуемый объем крови для проведения теста:
Взрослые и дети от 10 лет и старше: 6 мл
Дети 2-9 лет: 4 мл
Дети до 2 лет: 2 мл.

Примечание: у пациентов с иммуносупрессией требуется взять 2 пробирки крови.

Тест проводится в течение 25-26 часов. Уже на следующий день после забора крови, можно дать заключение о наличии туберкулезной инфекции.

Влияет ли предшествующая вакцинация БЦЖ на результаты теста T-SPOT.TB?

В отличие от кожных туберкулиновых проб, на результаты теста T-SPOT.TB не влияет предшествующая вакцинация БЦЖ. В тесте T-SPOT.TB используются два специфических антигена M. tuberculosis (ESAT-6 и CFP 10). Эти антигены не выявляются во всех штаммах БЦЖ и у большинства представителей семейства нетуберкулезных микобактерий.

Оборудование, которое должно быть в лаборатории для проведения теста:

Центрифуга для выделения PBMC (минимум 1800 RCF, способная поддерживать температуру образцов (18-25 °С) при использовании центрифугирования с градиентом плотности для выделения клеток)
Инкубатор с увлажнителем, способным поддерживать температуру 37±1 °С и поддержание 5% уровня СО2
Регулируемые автоматические пипетки
Устройство для визуализации и документирования, напр. , стереомикроскопом, увеличительное стекло, либо цифровой визуализатор для подсчета лунок

Из чего состоит набор T-SPOT.TB:

1 микротитровальный планшет: 96 лунок, поставляемая в виде 12 х 8-лунок стрипов; лунки покрыты мышиными моноклональными антителами к интерферону-гамма
2 флакона (0,8мл) Панель А: содержит антиген ESAT-6, бычий альбумин и антимикробные агенты
2 флакона (0,8мл) Панель В: содержит антиген CFP10, бычий альбумин и антимикробные агенты
2 флакона (0,8мл) Положительный контроль: содержит фитогемагглютинин для оценки функциональной способности клеток, бычий альбумин и антимикробные агенты
1 флакон (50мкл) 200х концентрированный Конъюгирующий реагент: мышиные моноклональные антитела к интерферону-гамма, конъюгированные с щелочной фосфатазой
1 флакон (25мл) Растворимого субстрата: готовый к использованию раствор BCIP/NBT+
Если Ваша лаборатория не может проводить тест T-SPOT.TB ежедневно или ВЫ должны транспортировать кровь для исследования в другую лабораторию, Вы можете использовать реагент T-Cell Xtend.

T-Cell Xtend® — реагент, продлевающий время до начала проведения исследования максимум на 32 часа.

Механизм действия реагента T-Cell Xtend:

При заборе крови происходит ряд изменений, в том числе активация гранулоцитов, приводящих к выработке пероксида, который ингибирует высвобождение интерферона γ Т-клетками. Использование реагента T-Cell Xtend блокирует гранулоциты и позволяет образцам храниться до 32 часов.
Реагент T-Сell Xtend производится также компанией Oxford Immunotec.
Реагент T-Cell Xtend прошел клинические испытания только при проведении теста T-SPOT.TB. На других тестах реагент не исследовался.

Результаты теста T-SPOT.TB могут быть положительными, отрицательными, сомнительными или неопределёнными. Результат определяется путем подсчета и регистрация количества «пятен» в лунках.

 Какова тактика при получении сомнительных или неопределенных результатов теста?

В случае получения сомнительных и неопределенных результатов рекомендуется проведение повторного анализа с использованием новой пробы крови, взятой во время следующего визита пациента к врачу.

ПРЕИМУЩЕСТВА ТЕСТА T-SPOT.TB:
Точность:
T-SPOT.TB — единственный тест для диагностики туберкулеза, чувствительность и специфичность которого по данным основных клинических исследований превышают 95% .

Достоверность:

T-SPOT.TB позволяет выявить инфицированных микобактериями туберкулеза даже среди «проблемных» популяций пациентов, включая иммигрантов и иммунокомпрометированных больных, не имеет перекрестных реакций с вакциной БЦЖ.

Простота:
Тестирование методом T-SPOT.TB требует всего одного визита к врачу и одной пробирки крови. Все этапы теста контролирует лаборатория.

Тест T-SPOT.TB может использоваться у всех категорий пациентов, в том числе для скрининга туберкулезной инфекции в группах риска.

Клинические данные теста T-SPOT.TB

T-SPOT.

TB Анализ высвобождения интерферона-γ при скрининге медицинских работников в девятнадцати больницах США

King, TC, Upfa M, et al. Т-ПОТНО. Эффективность анализа высвобождения интерферона-γ TB при скрининге медицинских работников в девятнадцати больницах США. Американский журнал респираторной и интенсивной терапии, Vol. 192, № 3 (2015), стр. 367-373. doi: 10.1164/rccm.201501 0199OC.

Это знаменательное исследование более 42 000 последовательных тестов из 19географически различных больниц США демонстрирует эффективность T-SPOT. ТБ тест.

Ключевые выводы в этой статье включают:

  • 98,9% коэффициент соответствия
  • 0,8% средний коэффициент конверсии (отрицательный результат превращается в положительный)
  • 17,6% средний коэффициент возврата (положительный результат превращается в отрицательный результат)
  • Т-ОБРАЗНОЕ. ТБ результаты сильно коррелируют с известными факторами риска туберкулеза (ТБ)
  • Это исследование продемонстрировало T-SPOT. ТБ Тест — надежный инструмент для скрининга медицинских работников

VIEW

Скрининг медицинских работников с помощью анализа высвобождения гамма-интерферона по сравнению с туберкулиновой кожной пробой: влияние на затраты и приверженность тестированию (исследование SWITCH)

Bernacki E, Humphrey F, Sneed L, Tao X, Wrighton-Smith P. «Скрининг медицинских работников с помощью анализа высвобождения интерферона-γ по сравнению с туберкулиновой кожной пробой: влияние на затраты и приверженность тестированию (исследование SWITCH)». J оккупировать Environ Med. 2012 июль; 54 (7): 806-15. дои: 10.1097/JOM.0b013e318254620f.

Это знаменательное исследование является первым в своем роде исследованием, в котором анализируется фактическая стоимость программы эпиднадзора за ТБ с использованием туберкулиновой кожной пробы (TST) или T-SPOT. Тест TB путем получения прямых измерений всех компонентов программы.

Основные выводы, сделанные в этом документе, включают:

  • Исследование разоблачает ложную экономическую подоплеку ТКП, демонстрируя, что на самом деле его выполнение стоит 73,20 доллара США за тест при учете всех компонентов программы скрининга ТКП
  • Тестовая цена T-SPOT 54,83 долл. США или ниже. Тест TB более экономичен, чем тест TST
  • T-SPOT. TB соответствует 99%; повышение соответствия ТКП до 98,5% потребует дополнительных затрат в размере 20,59 долл. США на одного сотрудника болезнь

    Кларк С.А., Мартин С.Л., Позняк А. и др. Туберкулезные антиген-специфические иммунные ответы могут быть обнаружены с использованием технологии ферментативно-связанных иммунных пятен у пациентов с вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ)-1 на поздних стадиях заболевания. Клин Эксп Иммунол. 2007;150(2):238–244. doi:10.1111/j.1365-2249.2007.03477.x

    В этом исследовании оценивалась возможность выявления специфических иммунных реакций на ТБ-антиген с помощью технологии ELISPOT у пациентов с ВИЧ-1 – трудно поддающейся скринингу популяции пациентов.

    Ключевой вывод этого исследования включает:

    • Чувствительность T-SPOT. Тест TB остается высоким у пациентов с ВИЧ, независимо от числа Т-лимфоцитов CD4

    VIEW

    Полезность T-SPOT. TB пограничная категория теста для повышения разрешающей способности теста для результатов, близких к пороговой точке

    Rego, K, Pereira K, et al. Утилита T-SPOT. Пограничная категория теста TB для повышения разрешения теста для результатов, близких к пороговой точке. Туберкулез. 2018;108:178-185. doi.org/10.1016/j.tube.2017.12.005.

    В этом документе проанализировано более 645 000 T-SPOT. TB тестов для проверки полезности пограничной зоны.

    Ключевые результаты этого исследования включают:

    • Пациенты, получившие пограничные результаты, могли быть неправильно классифицированы, если использовали тест с одной точкой отсечения без пограничной категории
    • Одобренный FDA тест T-SPOT. Пограничная зона теста TB обеспечивает повышенное разрешение теста вокруг точки отсечки теста
    • Доля недействительных результатов 0,6% в исследовании из > 645 000 тестов

    VIEW

    Диагностическая эффективность анализа интерферона-γ в цельной крови и иммуноферментного анализа на активный туберкулез

    Lai CC, Tan CK,et др. Диагностическая эффективность анализа интерферона-γ цельной крови и иммуноферментного анализа на активный туберкулез. J Microbiol Immunol Infect. 2011 Октябрь; 44 (5): 406-7. doi: 10.1016/j.jmii.2011.07.002. Epub 2011 Sep 8.

    В этом исследовании сравнивалась диагностическая эффективность двух анализов высвобождения гамма-интерферона у пациентов с подозрением на активный туберкулез.

    Ключевые результаты этого исследования включают:

    • T-SPOT. Тест TB дал меньше ложноотрицательных результатов, особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом, по сравнению с другим коммерчески доступным тестом IGRA
    • T-SPOT. ТБ тест имел более высокую чувствительность, чем другие имеющиеся в продаже IGRA

    Запросить исследование

    Скрининг на туберкулез новых сотрудников больницы Соблюдение требований, допуск к рабочему времени и стоимость с использованием туберкулиновой кожной пробы и тестов на высвобождение гамма-интерферона

    Фостер-Чанг, SA DNP, APRN-BC, COHN-S; Мэннинг, ML PhD, CRNP, CIC, FAAN; и другие. Туберкулезный скрининг новых сотрудников больницы Соблюдение требований, допуск к рабочему времени и стоимость с использованием туберкулиновой кожной пробы и анализа высвобождения гамма-интерферона. Здоровье и безопасность на рабочем месте. 2014 Sep:62(11): 460-467 doi.org/10.3928/21650799-20140902-02

    кожные пробы (ТКП) при обследовании вновь нанятого медицинского персонала.

    Ключевые результаты этого исследования включают:

    • Среднее время подготовки новых сотрудников к началу работы сократилось с 13,18 дней до 5,91 дней, когда учреждение использовало IGRA вместо TST
    • Расходы на скрининг на ТБ сократились на 38 % – 40%, когда учреждения использовали IGRA
    • Выбор наиболее подходящего теста на ТБ должен основываться на цели, условиях, эффективности и стоимости

    VIEW

    T-SPOT. ТБ вкладыш

    T-SPOT. Тест TB представляет собой диагностический тест in vitro для обнаружения эффекторных Т-клеток, которые реагируют на стимуляцию антигенами Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 и CFP10 путем захвата гамма-интерферона (IFN-γ) вблизи Т-клеток в цельной крови человека, собранной в цитрате натрия или гепарине натрия или лития. Он предназначен для использования в качестве вспомогательного средства при диагностике инфекции M.tuberculosis .

    Загрузить

    T-SPOT.TB: диагностический тест in vitro для измерения реакции Т-клеток на антигены, специфичные для Mycobacterium tuberculosis

    . 2006;10(1):57-63; обсуждение 64-5.

    дои: 10.1007/BF03256443.

    Антона Дж. Вагстафф 1 , Жан-Пьер Зеллвегер

    принадлежность

    • 1 Adis International Inc., Ярдли, Пенсильвания, 19067, США. [email protected]
    • PMID: 16646578
    • DOI: 10. 1007/BF03256443

    Антона Дж. Вагстафф и др. Мол Диагн Тер. 2006.

    . 2006;10(1):57-63; обсуждение 64-5.

    дои: 10.1007/BF03256443.

    Авторы

    Антона Дж. Вагстафф 1 , Жан-Пьер Зеллвегер

    принадлежность

    • 1 Adis International Inc., Ярдли, Пенсильвания 19067, США. [email protected]
    • PMID: 16646578
    • DOI: 10.1007/BF03256443

    Абстрактный

    Общая чувствительность анализа RD1 ELISPOT (T-SPO. TB), который подсчитывает Т-клетки, сенсибилизированные к специфическим пептидным последовательностям Mycobacterium tuberculosis, составила 81-97% в популяциях с подтвержденным туберкулезом, у которых 39-78% имели иммуносупрессивные состояния. У пациентов с подтвержденным туберкулезом соответствующая чувствительность RD1 ELISPOT по сравнению с туберкулиновой кожной пробой (TST) составляла 100% по сравнению с 89% у взрослых и 77% по сравнению с 35% у детей (из которых 39% были ВИЧ-позитивными). В отличие от TST, на чувствительность теста RD1 ELISPOT существенно не влияли возраст <36 месяцев, иммунологический статус или статус питания субъектов. Специфичность составила 100% в двух исследованиях, проведенных в Великобритании. Отдельные ложноположительные результаты были зарегистрированы у пациентов, инфицированных нетуберкулезной M. kansasii. Исследование, изучающее латентную туберкулезную инфекцию, не обнаружило существенной разницы в результатах анализа RD1 ELISPOT между ВИЧ-положительными и ВИЧ-отрицательными участниками, в то время как TST значительно варьировалась в зависимости от ВИЧ-статуса.
    Исследования по отслеживанию контактов продемонстрировали соответствие между анализом RD1 ELISPOT и TST 65–89.%. Существует значительная корреляция между положительным результатом и степенью контакта с индексным случаем для анализа RD1 ELISPOT, но не для TST, в исследованиях по отслеживанию контактов. В отличие от TST, анализ RD1 ELISPOT не смешивается с вакцинацией бациллой Кальметта-Герена.

    Похожие статьи

    • Сравнение собственного и коммерческого анализа ELISPOT-IFN-gamma на основе RD1 для диагностики инфекции Mycobacterium tuberculosis.

      Мантегани П., Пьяна Ф., Кодекаса Л., Галли Л., Скарпеллини П., Лаззарин А., Чирилло Д., Фортис С. Мантегани П. и соавт. Клин Мед Рез. 2006 декабрь;4(4):266-72. doi: 10.3121/cmr.4.4.266. Клин Мед Рез. 2006. PMID: 17210976 Бесплатная статья ЧВК. Клиническое испытание.

    • [Эволюция исследований IGRA].

      Арига Х., Харада Н. Арига Х. и др. Кеккаку. 2008 г., сен; 83 (9): 641-52. Кеккаку. 2008. PMID: 18979999 Обзор. Японский.

    • Продольная оценка теста ELISPOT на инфекцию Mycobacterium tuberculosis.

      Hill PC, Brookes RH, Fox A, Jackson-Sillah D, Jeffries DJ, Lugos MD, Donkor SA, Adetifa IM, de Jong BC, Aiken AM, Adegbola RA, McAdam KP. Хилл П.С. и др. ПЛОС Мед. 2007 июнь;4(6):e192. doi: 10.1371/journal.pmed.0040192. ПЛОС Мед. 2007. PMID: 17564487 Бесплатная статья ЧВК.

    • Отсутствие обратной связи между туберкулезной инфекцией и атопией: иммунный анализ на основе Т-клеток (RD1-ELISpot).

      Сойсал А., Бахчеджилер Н., Барлан И., Бакир М. Сойсал А и др. Детская Аллергия Иммунол. 2008 декабрь; 19 (8): 709-15. doi: 10.1111/j.1399-3038.2007.00708.x. Epub 2008 6 февраля. Детская Аллергия Иммунол. 2008. PMID: 18266833

    • Анализы высвобождения гамма-интерферона: принципы и практика.

      Лалвани А., Парик М. Лалвани А. и др. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010 апр; 28 (4): 245-52. doi: 10.1016/j.eimc.2009.05.012. Epub 2009 24 сентября. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010. PMID: 19783328 Обзор.

    Посмотреть все похожие статьи

    Цитируется

    • Разработка собственного метода точечного обнаружения SARS-CoV-2 с гамма-интерфероном ELISpot и без считывателя планшетов.

      Мак В. А., Коэлман Дж. Г. М., Онг Д. С.И. Мак В.А. и др. Дж. Вироловые методы. 2022 Февраль; 300:114398. doi: 10.1016/j.jviromet.2021.114398. Epub 2021 1 декабря. Дж. Вироловые методы. 2022. PMID: 34863782 Бесплатная статья ЧВК.

    • Анализ высвобождения гамма-интерферона как диагностический тест на туберкулезный увеит.

      Анг М., Вонг В., Нган К.С., Чи С.П. Анг М. и др. Глаз (Лонд). 2012 май; 26(5):658-65. doi: 10.1038/eye.2012.1. Epub 2012 3 февраля. Глаз (Лонд). 2012. PMID: 22302066 Бесплатная статья ЧВК.

    использованная литература

      1. Am J Respir Crit Care Med. 2004 1 августа; 170 (3): 288-95 — пабмед
      1. грудная клетка.

Оставьте комментарий