Что такое реакция на стеркобилин: Реакция на билирубин и стеркобилин

Стеркобилин качеств. проба (кал) > Качественное определение стеркобилина в кале > MedElement

Стеркобилин качеств. проба (кал) > Качественное определение стеркобилина в кале > MedElement

Также: Качественное определение стеркобилина в кале

Категория: Стеркобилин (кал)

Единица измерения: .

Краткое описание

  • Версия для печати

В норме стеркобилин присутствует в кале. Нарушение поступления билирубина в кишечник при заболеваниях печени или механическом препятствии оттоку желчи в результате закупорки или сдавления общего желчного протока приводит к снижению или полному отсутствию стеркобилина в кале, что отражается на окраске испражнений. Полное отсутствие стеркобилина можно установить только при химическом исследовании.

Усиленное желчеотделение или повышенный распад эритроцитов приводят к увеличению стеркобилина в кале. Установить это можно, исследуя количество стеркобилина, выделенное с каловыми массами за сутки.

Подробное описание

Унифицированный метод с двухлористой ртутью (проба Шмидта).
В результате реакции стеркобилина с двухлористой ртутью образуется соединение, имеющее розовое окрашивание. Применяются следующие реактивы: раствор двухлористой ртути (HgCl2 — хлорид ртути, сумма), 70 г/л раствора.Растворяют при кипячении, после охлаждения фильтруют.
Комочек кала величиной с лесной орех растирают в фарфоровой чашечке или пробирке с 3—4 мл раствора двухлористой ртути, закрывают крышкой или пробкой и оставляют при комнатной температуре в вытяжном шкафу на сутки. Контрольную пробу ставят так же, как опытную, но вместо двухлористой ртути берут воду.

В присутствии стеркобилина в опытной пробе появляется розовое окрашивание. Оценку результатов можно провести немедленно, если подогревать пробирки с опытной и контрольными пробами на пламени горелки. При наличии билирубина образуется зеленое окрашивание. В норме реакция положительная.

Метод с применением треххлористого железа.


Необходимые реактивы
1. Реактив Фуше — раствор треххлористого железа (FeCl3) 1 : 5 мл воды.
2. Концентрированная соляная кислота.

В стеклянный сосуд помещают 1 г фекальных масс, хорошо смешанных с 10 мл дистиллированной воды. Затем 5 мл из этой эмульсии фекальных масс смешивают с 5 мл концентрированной соляной кислоты и нагревают в течение 5 мин до 50 °С. После охлаждения под водопроводом к этой смеси добавляют 2—3 капли треххлористого железа. Реакция может регистрироваться немедленно — в присутствии стеркобилина появляется красная окраска.

Метод с применением ацетата цинка.
Необходимый реактив: Насыщенный раствор ацетата цинка (10 г ацетата цинка в 100 мл этилового спирта).

В пробирке смешивают до полной однородности 2—3 г фекальных масс и 100 мл насыщенного спиртового раствора ацетата цинка. В эту смесь добавляют 2—4 капли спиртового раствора йода и затем смесь фильтруют. Спустя 24 ч реакция регистрируется: в присутствии желчных пигментов фильтрат приобретает зеленую окраску.

Разделы Закрыть список разделов

На главную
  • Краткое описание
  • Подробное описание
  • Источники и литература
Наверх

Набор реагентов для клинического анализа кала, Россия — ВЛ-Медиа

Набор реагентов для клинического анализа кала

Принцип реакции:

   Морфологическое и химическое исследования кала дают суммарное представление о функции важнейших пищеварительных желез, оно отражает степень переваривания принятой пищи и состояние слизистой кишечного тракта.

Определение скрытой крови. В присутствии гемоглобина крови бензидин реагирует с перекисью водорода с образованием в течение первых 2 минут соединений, окрашенных в зеленый, сине-зеленый или синий цвет. Интенсивность окраски пропорциональна количеству крови в кале.

Определение стеркобилина. Стеркобилин взаимодействует с уксуснокислым цинком в присутствии раствора Люголя с образованием соединений, дающих зеленую флюоресценцию.

Определение билирубина.

Билирубин, поступающий в кишечник с желчью, под влиянием кишечной флоры восстанавливается, в результате чего образуется уробилин (стеркобилин) — нормальный пигмент кала и уробилиноген — продукт более полного восстановления.

Билирубин под действием реактива Фуше превращается в зеленый биливердин; интенсивность окраски пропорциональна количеству билирубина в кале.

Реагенты:

  1. Бензидин – 1 флакон (1,0 г)
  2. Уксусная кислота (50%) – 1 флакон (100 мл)
  3. Гидроперит – 1 упаковка
  4. Уксусная кислота (30 %) – 1 флакон (100 мл)
  5. Уксуснокислый цинк (10%) – 1 фл (100 мл)
  6. Раствор Люголя – 1 флакон (50 мл)
  7. Реактив Фуше — 1 флакон (100 мл)
  8. Раствор судана III (2%) – 1 флакон (100 мл)
  9. Глицерин – 1 флакон (130 г)
  10. Метиленовый синий (2%) – 1 флакон (20 мл)

Оборудование.


—фарфоровые ступки;                                                 -стеклянные палочки;
-чашки Петри;                                                              -воронки;
-предметные стекла;                                                   -покровные стекла;
-пробирки;                                                                    -штативы;
-горелка;                                                                        -весы;
-микроскоп;                                                                  -бумага фильтровальная;
 -перчатки резиновые.

Приготовление нативных препаратов.

Кусочек кала величиной с лесной орех помещают в ступку, добавляют немного водопроводной воды и растирают до консистенции жидкой кашицы. Капли  приготовленной эмульсии стеклянной палочкой наносят на предметные стекла и готовят не менее 6 препаратов: нативный, с раствором Люголя, с метиленовым синим, с суданом III, с 30% уксусной кислотой и глицерином.

Проведение определения:

  1. Определение скрытой крови

Приготовление 3% раствора перекиси водорода. Растворить 3 таблетки гидроперита в 50 мл дистиллированной воды. Раствор стабилен при хранении в посуде из темного стекла и температуре 2-8 С в течении 3 месяцев.  

Приготовление раствора бензидина. Перед употреблением немного бензидина (~500 мг) растворяют в 5 мл 50% уксусной кислоты до полного растворения.  Раствор годен к употреблению, нестойкий.

Ход определения.

    Неразведенный кал наносят толстым слоем на предметное стекло, добавляют 2-3 капли раствора бензидина в уксусной кислоте и столько же перекиси водорода. Перемешивают стеклянной палочкой. Положительная реакция на кровь дает зеленое или сине-зеленое окрашивание в течение первых 2 мин. Окрашивание, наступившее позже, чем через 2 мин, не учитывают.

  1. Определение билирубина

   Приготовление эмульсии кала:  кусочек кала помещают в фарфоровую ступку и растирают в небольшом количестве дистиллированной воды или изотоническим растворе хлорида натрия.

 Эмульсию кала поместить в 2 пробирки по 1-2 мл, в опытную пробирку добавить по каплям реактив Фуше (объем реактива не должен быть больше эмульсии кала). В присутствии билирубина появляется зеленое или зеленоватое окрашивание.

Сравнить опытную и контрольную окраску в проходящем свете.

  1. Определение стеркобилина

Приготовление эмульсии кала:  кусочек кала помещают в фарфоровую ступку и растирают в небольшом количестве дистиллированной воды или изотоническим растворе хлорида натрия.

Приготовление рабочего раствора Люголя. Разбавить раствор Люголя дистиллированной водой в соотношении 1:1.

Эмульсию кала внести в пробирку в количестве 1-2 мл, добавить 1-2 мл раствора уксуснокислого цинка (предварительно взболтать) и 1 каплю рабочего раствора Люголя.

Полученную смесь профильтровать в стеклянную пробирку, при наличии стеркобилина (положительная реакция) раствор дает зеленую флюоросценцию, видную на темном фоне.

  1. Исследование нативного препарата.

При микроскопическом исследование нативного препарата различают следующие элементы: детрит, остатки пищи, элементы слизистой оболочки кишечника, кристаллические образования, флору, мышечные волокна, нейтральный жир в виде бесцветных капель, жирные кислоты и мыла. растительную клетчатку и крахмал, микроорганизмы, яйца гельминтов, кристаллы.

  1. Исследование кала с суданом III

   Капли нейтрального жира и капли жирных кислот окрашиваются в оранжевый цвет. Нагревание такого препарата ведет к расщеплению мыл (если они есть) и образованию капель жирных кислот, которые также окрашиваеются в оранжевый цвет.

   На предметное стекло стеклянной палочкой нанести 1-2 капли эмульсии кала или жидкой каловой массы, внести в препарат 1-2 капли раствора судана III, эмульсия и реактив смешивают краем покровного стекла и рассматривают сначала под малым (8х10), а затем под большим (40х10) увеличением.

  1. Исследование кала с метиленовым синим

      Для получения 0,5% раствора метиленового синего, перед использованием, 2% раствор метиленового синего разбавить дистиллированной водой в соотношении 1:3.

При  обнаружении жира в виде капель микроскопируют препарат с метиленовым синим, капли нейтрального жира бесцветны, капли жирных кислот окрашены в голубой или синий цвет.

На предметное стекло стеклянной палочкой нанести 1-2 капли эмульсии кала или жидкой каловой массы, внести в препарат 1-2 капли раствора метиленового синего (0,5%), эмульсия и реактив смешивают краем покровного стекла и рассматривают сначала под малым (8х10), а затем под большим (40х10) увеличением.

  1. Исследование кала с глицерином

Глицерин очищает от бактерий и калового дейтрита яйца гельминтов, «просветляет» препарат и помогает установить принадлежность обнаруженных яиц. При обнаружении яиц гельминтов необходимо провести специальное исследование по Като.

На предметное стекло стеклянной палочкой нанести 1-2 капли эмульсии кала или жидкой каловой массы, внести в препарат 1-2 капли глицерина, эмульсия и глицерин смешивают краем покровного стекла и рассматривают сначала под малым (8х10), а затем под большим (40х10) увеличением.

  1. Исследование кала с нагреванием.

     Дифференцирует жирные кислоты от мыл. При обнаружении глыбок и игл нативный препарат подогревают (не доводя до кипения) и тотчас микроскопируют. Образование капель после нагревания указывает на наличие жирных кислот, при остывании препарата капли вновь превращаются в глыбки (препарат можно подогреть повторно. Если при нагревании капель не образовалось, а иглы и глыбки остаются , нагревают препарат с уксусной кислотой.

  1. Исследование с 30% раствором уксусной кислоты

Глыбки и кристаллы мыл сплавляются в капли после нагрева (до кипения) препарата с уксусной кислотой . Уксусная кислота расщепляет мыла и освобождает жирные кислоты, которые плавятся, образуя капли.

СОЕДИНЕНИЕ ДЛЯ БОЧЕК: c05793

СОЕДИНЕНИЕ ДЛЯ БОЧКОВ: c05793
    СОЕДИНЕНИЕ: C05793
Ввод
C05793 Соединение
Имя

L-уробилин;
L-стеркобилин;
Стеркобилин

Формула

С33х56Н4О6

Точная масса

594.3417

Мол. вес

594.7415

Структура
Реакция

R06255

Путь
map00860   Метаболизм порфиринов
Прочие БД
CAS:  34217-90-8
PubChem:  8088
ChEBI:  29023
3DMET:  B05116
NIKKAJI: J37. 198J
Данные KCF


АТОМ        43
            1   C8y C    23.9714  -19.7172
            2   C8y C    23.5488  -18.3878
            3   C2b C    25.1781  -20.4194
            4   N4x N    22.8536  -20.5352
            5   C8y C    22.1514  -18.3878
            6   C1b C    24.2307  -17.1813
            7   C2y C    26.3915  -19.7172
            8   C8y C    21.7083 -19,7172
9 C1A C 21.4426 -17,1677
10 C1B C 23.5353 -15.9953
11 C2Y C 26.8210 -18.3811
            12  N2x N    27.5301  -20.5352
            13  C1b C    20.5015  -20.4262
            14  C6a C    23.5215  -14.5977
            15  C2y C    28.2252  -18.3811
            16  C1b C    26.1327  -17.1745
            17  C2y C    28.6619  -19.7172
            18  C1y C    19.3043  -19.7307
19 O6A O 22.3082 -13.9092
20 O6A O 24.7215 -13.9025
21 C1A C 28. 9276 -17.1540
22 C1B C 26,8142 -15.9542
            23  C1b C    29.8547  -20.3989
            24  C1y C    18.8727  -18.3948
            25  N1x N    18.1707  -20.5556
            26  C6a C    26.8142  -14.5567
            27  C1y C    31.0748  -19.7036
            28  C1y C    17.4611  -18.3948
            29  C1b C    19.5751  -17.1745
30 C5X C 17.0368 -19,7307
31 O6A O 28.0210 -13.8547
32 O6A O 25.5872 -13.8682
33 C1Y C 31.4976  -18.3607
            34  N1x N    32.2133  -20.5285
            35  C1a C    17.1027  -17.0315
            36  C1a C    19.2020  -15.8112
            37  O5x O    15.8155  -20.4194
            38  C1y C    32.9084  -18.3607
            39  C1a C    30.8023  -17.1474
            40  C5x C    33.3312 -19,7036
41 C1B C 33.6108 -17,1474
42 O5X O 34.5447 -20,3920
43 C1A C 32,9018 -15,9203
Связанка 46
1 1 2 2
2 1 3 1
3 1 4 1
4 2 5 1
5 2 6 1
6 3 7 2
7 4 8 1
8 5 9.
9 6 10 1
10 7 11 1
11 7 12 1
12 8 13 1
13 10 14 1
14 11 15 2
15 11 16 1 9
16 12 17 17 2
17 13 18 18 1
18 14 19 1
19 14 20 2
20 15 21 1
21 16 22 1
22 17 23 1
23 18 24 1
24 18 25 1
25 22 26 1
26 23 27 1
27 24 28 1
28 24 29 1
29 25 30 1
30 26 31 1
31 26 32 2
32 27 33 1
33 27 34 1
34 28 35 1
35 29 36 1
36 30 37 2
37 33 38 1
38 33 39 1
39 34 40 1
40 38 41 1
41 40 42 2 2 24 40 1
40 38 41 1
41 40 42 2 2
42 41 43 1
43 5 8 2
44 15 17 1
45 28 30 1
46 38 40 1


» Японская версия

  Все ссылки  

Путь (1)
   ПУТЬ КЕГА (1)
Химическое вещество (5)
   ПабХим (1)
   ЧЭБИ (1)
   3ДМЕТ (1)
   ХМДБ (1)
   НИККАДЖИ (1)
Химическая реакция (1)
   РЕАКЦИЯ В БОЧКЕ (1)
Все базы данных (7)
 
 Скачать RDF

DBGET интегрированная поисковая система базы данных

Стеркобилин (SB) ИФА набор | Abbexa Ltd

  • Набор для ИФА на стеркобилин (SB)

Описание Публикации и обзоры (0)

Стеркобилин (SB) ELISA Kit представляет собой набор ELISA для количественного измерения in vitro концентраций стеркобилина (SB) в сыворотке, плазме, стуле и других биологических жидкостях.

Цель Стеркобилин (СБ)
Реактивность Общий (все виды)
Протестированные приложения ИФА
Рекомендуемые разведения Оптимальные разведения/концентрации должны определяться конечным пользователем.
Хранение Поставляется при температуре 4 °C. После получения храните набор в соответствии с инструкциями по хранению в руководстве к набору.
Срок действия Срок действия данного комплекта 6 месяцев.
Стабильность Стабильность набора определяется скоростью потери активности. Потери составляют менее 5% в течение срока годности при соответствующих условиях хранения. Чтобы свести к минимуму колебания производительности, необходимо строго контролировать рабочие процедуры и лабораторные условия. Также настоятельно рекомендуется, чтобы весь анализ выполнялся одним и тем же пользователем.
Испытательный полигон 1,23 нг/мл — 100 нг/мл
Чувствительность
Стандартная форма Лиофилизированный
Метод обнаружения Колориметрический
Тип анализа Конкурентный
Данные анализа Количественный
Тип образца Сыворотка, плазма, стул и другие биологические жидкости.
Тип цели Антиген
Принцип анализа Этот набор основан на конкурентной технологии твердофазного иммуноферментного анализа. Антитело предварительно наносят на 96-луночный планшет. Стандарты, тестовые образцы и реагент, конъюгированный с биотином, добавляют в лунки и инкубируют. Реакция конкурентного ингибирования происходит между меченым биотином SB и немеченым SB на предварительно покрытом антителе. Затем добавляют реагент, конъюгированный с HRP, и весь планшет инкубируют. Несвязавшиеся конъюгаты удаляют с помощью промывочного буфера на каждом этапе. Субстрат TMB используется для количественного определения ферментативной реакции HRP. После добавления субстрата TMB только лунки, содержащие достаточное количество SB, будут давать продукт синего цвета, который затем меняется на желтый после добавления кислого стоп-раствора. Интенсивность желтого цвета обратно пропорциональна количеству SB, связанного на пластине. OD измеряют спектрофотометрически при 450 нм в ридере для микропланшетов, по которому можно рассчитать концентрацию SB.
Комплект компонентов Перечисленные компоненты комплекта приведены только для справки. Руководство по продукту может незначительно отличаться. Изделие следует использовать в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к изделию и поставляемыми вместе с ним.
  • 96-луночный микропланшет с предварительно нанесенным покрытием
  • Стандарт
  • Стандартный буфер для разбавления
  • Буфер для промывки
  • Реагент для детекции A
  • Реагент для детекции B
  • Разбавитель A
  • Разбавитель B
  • Субстрат TMB
  • Стоп-раствор
    • 90742 Закрепитель планшетов 90742
Необходимый материал, но не предоставляется
  • Инкубатор 37°C
  • Многоканальные и одноканальные пипетки и стерильные наконечники для пипеток
  • Squirt bottle or automated microplate washer
  • 1. 5 ml tubes
  • Distilled water
  • Absorbent filter papers
  • 100 ml and 1 liter graduated cylinders
  • Microplate reader (wavelength: 450 nm)
  • ELISA Shaker
Приготовление реагентов Эта процедура предназначена только для справки. Руководство по продукту может незначительно отличаться. Изделие следует использовать в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к изделию и поставляемыми вместе с ним.
  • 1) Стандарт: приготовьте стандарт с рекомендуемым объемом стандартного разбавляющего буфера, чтобы приготовить стандартный раствор. Затем используйте буфер Standard Diluent для проведения серийных разведений стандартного раствора, как указано в протоколе.
  • 2) Промывочный буфер: Разбавьте концентрированный промывочный буфер дистиллированной водой, как указано в протоколе.
  • 3) Подготовка реагента для обнаружения: Рассчитайте общий объем необходимого рабочего раствора. Разбавьте реагент для обнаружения A и реагент для обнаружения B разбавителем A и разбавителем B соответственно в соотношении 1:100.
Процедура анализа Эта процедура предназначена только для справки. Руководство по продукту может незначительно отличаться. Изделие следует использовать в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к изделию и поставляемыми вместе с ним.
  • 1) Набор стандартных, тестовых образцов и контрольных лунок.
  • 2) Аликвоту по 50 мкл разбавленного стандарта в лунки для стандарта.
  • 3) Аликвоту 50 мкл буфера Standard Diluent в контрольную (нулевую) лунку.
  • 4) Аликвоту 50 мкл разведенных образцов в лунки для образцов.
  • 5) Немедленно по 50 мкл детектирующего реагента А в каждую лунку. Инкубировать в течение 1 часа при 37 ° С.
  • 6) Промыть 3 раза.
  • 7) Аликвоты по 100 мкл реагента для детекции B в каждую лунку. Инкубируйте в течение 30 минут при 37 ° C.
  • 8) Промыть 5 раз.
  • 9) Аликвоты по 90 мкл субстрата TMB в каждую лунку. Инкубировать в течение 10-20 минут при 37 ° C.
  • 10) Аликвоту 50 мкл стоп-раствора.
  • 11) Измерьте ОП при 450 нм.
Протокол Эта процедура предназначена только для справки. Руководство по продукту может незначительно отличаться. Изделие следует использовать в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к изделию и поставляемыми вместе с ним.
  • Перед использованием доведите компоненты набора и образцы до комнатной температуры (18–25 °C). Рекомендуется построить стандартную кривую для каждого теста.
  • 1. Поместите лунки со стандартом, тестовым образцом и контрольным (нулевым) на планшет с предварительно нанесенным покрытием соответственно, а затем запишите их положение. Рекомендуется измерять каждый стандарт и образец как минимум в двух экземплярах.
  • 2. Добавьте по 50 мкл каждого стандарта, контроля и образца в соответствующие лунки.
  • 3. Снимите крышку и удалите жидкость.
  • 4. Сразу аликвоту 50 мкл рабочего раствора. Закройте планшет крышкой и инкубируйте в течение 1 ч при 37°С.
  • 5. Снимите крышку и выбросьте раствор. Промойте планшет 3 раза промывочным буфером 1X.
  • 6. Добавьте по 100 мкл рабочего раствора детектирующего реагента В в каждую лунку, закройте и инкубируйте при 37°C в течение 30 мин.
  • 7. Слейте раствор и промойте планшет 5 раз промывочным буфером, как описано в предыдущем шаге.
  • 8. Внесите аликвоты по 90 мкл субстрата ТМБ в каждую лунку. Закройте планшет крышкой и инкубируйте при 37°С в течение 10–20 мин. Избегайте воздействия света. Время инкубации предназначено только для справки, оптимальное время должно определяться конечным пользователем. Не превышать 30 мин.
  • 9. Добавьте в каждую лунку по 50 мкл стоп-раствора. Немедленно считывайте при 450 нм.
Расчет результатов Этот анализ является конкурентным, поэтому существует обратная корреляция между концентрацией SB в образце и измеренной абсорбцией. Создайте график с логарифмом стандартной концентрации (ось Y) и средней измеренной абсорбции (ось X). Примените наиболее подходящую линию тренда через стандартные точки. Концентрацию SB в образцах можно интерполировать по стандартной кривой.
Точность анализа Precision Intra-assay (Прецизионность внутри анализа): 3 образца с низким, средним и высоким уровнями стеркобилина (SB) были протестированы 20 раз на одном планшете соответственно.
Прецизионность между анализами (прецизионность между анализами): 3 образца с низким, средним и высоким уровнями стеркобилина (SB) были протестированы на 3 разных планшетах, по 8 повторов в каждом планшете.
CV (%) = (стандартное отклонение / среднее значение) × 100
Внутри анализа: CV
Между анализами: CV
Наличие Отправка в течение 5-7 рабочих дней.
Примечание Этот продукт предназначен только для исследовательских целей. Диапазон и чувствительность могут быть изменены. Пожалуйста, свяжитесь с нами для получения последней информации о продукте. Для получения точных результатов концентрации пробы должны быть разбавлены до средней концентрации набора.

Оставьте комментарий